微生物培養方法范文
時間:2024-01-05 17:42:14
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篇1
微生物檢驗培養基質量的好壞、配制使用和保存是否正確等直接影響到檢測結果的準確性。現就微生物檢驗培養基的質量控制方法淺談如下:
1 培養基的儲存
干粉培養基應保存在陰涼干燥處,避免陽光直射。開瓶后的干粉培養基易吸濕,應注意防潮并在6個月內用完。應定期對儲存中的培養基進行常規檢查,如容器密閉性復查、首次開封日期、內容物的感官檢查,如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。
2 培養基的制備
稱量時要用專用的角匙,避免交叉污染。復水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養基中,影響微生物的生長。含有瓊脂粉的培養基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘:加熱培養基時一定要進行攪拌。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。一般培養基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃ 15min;含糖或特殊培養基,按照國家標準或生產商提供的說明滅菌。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值,應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中,如果需要調整培養基的pH,應用1mol/L NaOH或1mol/L HCL調整,注意不可反復調pH,否則會影響培養基的滲透壓。滅菌以后的培養基應該迅速冷卻至所需溫度并妥善保存。
3 培養基的性能測試
3.1 外觀控制:制備好的培養基應有相應的顏色,一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化,是否蒸發/脫水。
3.2 污染控制:從每批制備好的培養基中選取部分進行污染測試(無菌試驗),確定無微生物生長方可使用。
3.3 性能測試
3.3.1 測試菌株:選擇測試菌株是具有其代表種的穩定特性并能有效證明實驗室特定培養基最佳性能的一套菌株,應來自國際/國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株,菌株的選擇參考衛生行業標準WS/T232-2002《商業性微生物培養基質量檢驗規程》。
3.3.2 定量測試方法:常用改良Miles-Misra法。測試菌株、過夜培養物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區域并標記;從最高稀釋度開始,分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區域;將稀釋液涂滿整個1/4區域,37℃培養18h;對易計數的區域計數,按公式計算生長率(生長率=待測培養基平板上得到的菌落總數/參考培養基平板上獲得的菌落總數)。非選擇性培養基上目標菌的生長率應不低于0.7,選擇性培養基上目標菌的生長率應不低于0.1。
3.3.3 半定量測試方法:常用改進的劃線法接種法。平板分AB-CD四區,共劃16條線,平行線大概相隔0.5cm,每條有菌落生長的劃線記作1分,每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分,沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分,分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養基上應呈現典型的生長,而非目標菌的生長應部分或完全被抑制,目標菌的生長指數G大于6時,培養基可接受。
3.3.4 定性測試方法:常用平板接種觀察法。用接種環取測試菌培養物,在測試培養基表面劃平行直線。按標準中規定的培養時間和溫度對接種后的平板進行培養,目標菌應呈現良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態,非目標菌應是微弱生長或無生長。
總之,做好微生物檢驗培養基的質量控制是保證結果準確的基礎和關鍵。
篇2
關鍵詞:生物教學;創造性思維能力;培養
一、課堂教學中教師主導、學生主體是發展學生創造性思維的主陣地
新課程教學理念要求以教師為主導,學生為主體的教學模式進行教學。也就是課堂上充分突顯學生發現問題、提出問題、分析問題、解決問題的過程,教師在學生的學習遇到困難時,需要給予學生適當的啟示,以達到幫助學生克服困難的目的。
例如,在指導學生做還原糖、蛋白質實驗時,有學生提出問題:為什么斐林試劑必須現配現用?斐林試劑使用時要混合后才能用,而雙縮脲試劑如果混合使用又會怎么樣?如果雙縮脲先入B液,后加入A液會怎樣?對于學生提出的問題,首先給予肯定,那么如何解答學生提出的問題,培養學生的創造性思維,這就需要教師的啟示,啟發學生從斐林試劑的實際成分和化學性質入手,最終學生理解斐林試劑實際上用的就是新制Cu(OH)2,此時的氫氧化銅處于膠體狀態。如果放置過久的話,氫氧化銅完全沉淀,反應無法發生,所以現配現用。先加氫氧化鈉是為銅離子和蛋白質反應提供一個堿性環境,如果混裝會生成氫氧化銅沉淀而使實驗失敗,如果先加硫酸銅,會使溶液呈藍色而觀察不到現象。通過教師的啟發不僅使學生學到了生物知識,更重要的是培養了學生的創造性思維能力。
二、生物小組合作學習是學生培養創造性思維的有效形式之一
生物問題往往可以用不同的方式方法加以解決,通過小組合作學習的形式,每個學生都有機會提出自己的解題方法,同時,又能分享別人的解題方法,共同討論不同方法的優缺點。
例如,在復習減數分裂同源染色體時,我在黑板上寫出“同源染色體”,要求學生4~5個人為一個小組,以小組形式圍繞“同源染色體”展開討論,我們所學過的高中生物知識哪些與“同源染色體”有關,有什么關系?通過討論分析,歸納總結,學生較好地完成了對相關知識的復習,通過小組合作實驗有利于提高學生生物創造性思維能力的培養。
三、生物教學中設計合理猜想,也可以發展學生的創造性思維
在我們的教學中,創設一些情境,讓學生體會真實的問題,得出合理的猜想,并通過學生自主探索、動手操作、合作交流等方法,檢驗猜想的正確性,使生物的教學活動成為具有無限樂趣的活動,讓學生在活動中不斷體會成功的喜悅,久而久之,他們的好奇心、求知欲及對生物的興趣就會充分體現在學習中。
例如,在學“免疫調節”一節時,教師播放“泡泡男的視頻”(免疫學歷史上的重要人物)。讓學生思考問題:內環境穩態的調節機制是什么?“泡泡男孩”能用意念感知病原體的存在嗎?“泡泡男孩”的內分泌系統正常嗎?他能否借助甲狀腺激素直接殺滅病原體?哪種調節機制可以殺滅病原體?渴望媽媽擁抱的“泡泡男孩”為什么生活在封閉的環境中?由于情境的背景材料來源于生活,來源于社會實際,學生感到既熟悉,又奧妙無窮。
四、以學生動手操作為基礎,積極訓練思維,發展創新能力
思維往往是從動作開始的,切斷活動與思維的聯系,思維往往就不能得到較好發展,即動手操作是最易于激發學生思維和想象的一種活動。在此過程中,學生的求知欲和探索精神一旦被激發,學生的思維就會有創新火花閃現。教師恰當地利用這種狀態,可以誘導學生創新思維的發展。同時,在教學中,還要以有意識地訓練學生的思維為重點發展創新能力,訓練思維主要有兩個方面:一是發散思維訓練。在教學中要采用靈活多樣的發散思維訓練,循循善誘,啟發引導學生從多角度進行大膽嘗試,提出合理、新穎的解決方法。由此達到開闊學生視野、培養學生創新能力之目的。二是創造性想象訓練。沒有想象就沒有創新,創造性思維離不開想象。由此,教師應提供材料,使學生把頭腦中原有的表象加以糅合和變幻,創造出新奇的與眾不同的巧妙解法。
五、要養成學生良好的性格,良好的個性是培養學生創造性思維的基本條件
人的創造性不僅受認知因素的影響,而且還受個性的影響。如果沒有正確的學習目標、遠大的理想以及努力進取、持之以恒的精神狀態,就不可能經常自覺地進行創造性的思考。因此,教師首先在教學中要引導學生樹立遠大的目標,經常讓學生閱讀教材中的“細胞學說建立的過程”“科學家的故事”“科學前沿”等了解科學家的光輝思想,幫助學生樹立尊重科學、一切從實際出發、實事求是的態度,激勵學生努力學習,敢于創新,使學生明確學習的目的,樹立明確的目標,從而產生持久的創造性思維的動力。
其次,提倡學生勤思與多問。要想有創造,就必須勤于思考,在教學中老師應鼓勵學生敢于質疑問難。即使學生提出的問題非常幼稚,也是他頭腦思考的結果,教師也要耐心予以解釋,不可挫傷他們的積極性。
參考文獻:
篇3
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關鍵詞 高中生物習題 批判性思維 生物學教學
中圖分類號 G633.91 文獻標志碼 A
當下較多的學生傾向于接受已有的結論,這種被動的思維傾向使學生不關心知識的來龍去脈,更缺乏對課本知識或權威提出質疑的內在動力。
《普通高中生物課程標準(實驗)》的基本理念和課程目標中均提出:倡導探究性學習,力圖促進學生學習方式的改變,逐步培養學生批判性思維的能力等,并具體表現在教材中,如在人教版生物必修1第111頁和必修2第70、82頁以及必修3第26頁中都設立了“批判性思維”欄。
1 批判性思維的含義
批判性思維是一種思維過程、思維方法,具有積極思考、自主分析和提出新見的特征,通過求證、反思等手段,培養學生合理質疑和科學批判的能力。教師要培養學生的批判性思維,可以從精神和技能這兩個方面出發,對學生進行形式多樣的培養、訓練,達到讓學生主動質疑、批判、自主思考的目的,從而提高學生的科學思維品質,促進其科學素養的提高。批判性精神是批判性思維的特點,是批判性思維產生和發展的動力;批判性技能是進行有效的批判性思維活動所具備的方法和策略,并在此基礎上發展成提出批判性問題的能力、謬誤分析的能力等。
2 培養學生批判性思維的意義
2.1 有利于增強學生學習能力
高中生物課標強調,在教學過程中要不斷培養學生的批判性思維能力,這不僅能夠增強學生對生物相關知識的理解,還能幫助學生構建相關的生物知識框架。如在理解生物知識本源時,學生就可以運用生物學的理論知識解釋生活中的客觀現象,然后運用生物思維對其進行概括、總結、歸納出相關的生物知識。
2.2 有利于提高學生學習主動性
在學習過程中,如果學生質疑課本上的知識,學生就會不斷提出問題。而不斷提出問題的過程就是不斷主動學習的過程。學生不斷解決自己提出的疑問時,學習效率也就不斷增加,并不斷體驗到成功的喜悅。這樣就形成良性循環,學生學習的主動性也就得到了提升。
2.3 有利于學生創造性思維的培養
批判性思維和創造性思維是人的思維的兩種基本類型,批判性思維是創造性思維的基礎,創造性思維是批判性思維的發展,批判是創造的主要源泉。教師只有對學生進行批判性思維能力的訓練,他們的創造性思維才會有創新的方向,才能提高其創造性思維的準確度,創新往往來源于批判。
3 高中生物習題教學中學生批判性思維的培養方法
在高中生物學教學時,教師可利用人教版教材中“批判性思維”欄目、開放性的習題等專門的欄目和問題來達到培養學生批判性思維的能力。也可以提供一些有爭議的觀點要求學生發表自己的看法,如生物科技的利弊的辯論等,或利用圖表題等培養批判性思維。
3.1 利用人教版教材中“批判性思維”欄目培養學生批判性思維
雖然人教版高中生物教材上“批判性思維”的欄目只有4個,但在教學中,教師應把批判性思維的培養融合到整個教學中。人教版教材中“批判性思維”的內容如表1。
3.1.1 為學生提供自己發現問題、自己思考的機會
學生通過模擬實驗“細胞大小與物質運輸的關系”知道了細胞體積越大,其相對表面積越小,細胞的物質運輸的效率就越低的結論。再通過教材批判性思維問題引導學生思考:“既然細胞越小,細胞表面積相對就越大,細胞的物質運輸的效率就越高,細胞體積不是越小越好嗎?”這樣可以使學生把所學的內容與問題聯系起來。通過問題引起學生的注意,然后啟發學生再思考,從而達到培養學生批判性思維的能力。如教師可以給出一段材料或者是圖片,讓學生進行分析并提出問題。學生主動提出問題,要比教師直接給出結論效果要好的多。
3.1.2 引出學生的不同觀點,并使之理解
學生在學習完“基因、蛋白質與形狀的關系”這個知識點后,教師給出問題“你如何評價基因決定生物體的性狀這一觀點?”這時一大部分學生給出的觀點就是“基因決定生物性狀”,少部分的學生可能會考慮到環境對性狀的作用。教師應該對后一個答案讓學生進一步的探討,然后組織學生集體討論出正確的答案,即性狀的形成往往是內因與外因共同作用的結果,其中內因起決定作用。教師要引導學生敢于追求新的觀念,借助實證理解不同觀點。
3.1.3 確保探討課題的時間,在反思中成長
在學習完基因突變這一個知識點后,教師給出問題“有人認為,自然條件下基因突變率很低,而且大多數基因突變對生物體是有害的,因此,它不可能為生物的進化提供原材料。你認為這樣的看法正確嗎?為什么?”這相當于一個反思性的問題,其實批判性思維也是一種反思性行為,課題的解決也要經過反復的思考。基因突變對生物有害還是有利,學生可以舉出很多的例子來證明,但是能不能為生物進化提供原材料學生可能要爭論很久。通過這個探討的過程學生才能理解。
3.1.4 引出證據和根據,培養批判性思維
通過“實例一:血糖平衡的調節”的學習,學生理解了血糖的來源和去路,然后教師給出問題“既然血糖是提供能量的,血糖越多,能量供應就越充足,血糖含量不是越高越好嗎?對此你持什么觀點?你的論據是什么?”學生很容易回答出血糖不是越高越好,這里關鍵的問題是如何證明自己的觀點。聯系激素的作用可以進行血糖調節,教師引入血糖調節的模型實驗,讓學生通過實驗回答問題,能很好地培養學生批判性思維。
教師可以設計相關上述類似的題目來進行教學,培養學生的批判性思維。如:藍藻中有葉綠體,因為它能進行光合作用。蛋白質肽鏈的盤曲和折疊被解開時,其特定的功能發生改變。分子的雙螺旋被解開時,其功能也將失去。在蛋白質合成旺盛的細胞中DNA分子多,轉錄成的mRNA分子也多,從而翻譯成的蛋白質就多,如胰腺細胞與口腔上皮細胞相比較就是如此。真核生物進行有性生殖時,后代從雙親各獲得一半的DNA。凋亡細胞內的基因表達都下降等。
3.2 利用開放性習題培養學生批判性思維
如人教版生物必修1第一章第二節細胞的多樣性和統一性“練習”的“拓展題”和章末“自我檢測”中的“思維拓展”。
拓展題:目前,對基因的研究可以說如火如荼,方興未艾。既然生物科學的研究已經深入到基因水平,還需要研究細胞嗎?說說你的看法。
思維拓展:生命系統是由許多層次組成,其實我們周圍世界各種事物的結構或組成與此類似。你能圖示你所在的學校的組成層次和相互關系嗎?由此,你體會到以系統的視角分析各種事物的好處有哪些?
從上面的題目中,可以看出拓展題目開放性比較大,教師在教學時也不必給出標準答案,但是要根據學生的具體情況把握教學的深度。通常在教學中學生練習的習題都是封閉式,有固定的標準答案,這種類型的題目容易將受試者預設、囚禁在有限的答案選擇中,而忽略受試者在作答時可能牽涉其中的個人人格特質、興趣、情感、專長而在開放度上受到限制。在這種慣性的影響下,學生往往也會產生一種凡是題中出現的條件都要用上的思維定勢,不能對題目進行邏輯推理分析。
開放性習題與封閉式的習題不同,開放題中的有用信息和無用信息是混在一起,會產生干擾因素。這就要求學生在解題時,需要認真分析信息與問題的關系,舍棄無用信息,充分利用有用信息,提高鑒別能力,從而培養學生思維的批判性。
生物學科是一門以實驗為基礎的學科,實驗的開放性能很好地培養學生批判性思維技能,所以教師還可以設計一些實驗方面的習題。如實驗過程中是否能確認變量,找到關鍵的變量來判斷學生是否只會用唯一的答案原因形成單一的見解,是否能用多觀點,系統看待問題。
3.3 利用概念辨析習題培養學生的批判性思維
缺乏批判性思維的學生往往表現為缺乏辨別正誤、區別真偽的信心,缺乏敢于質疑的態度。在教學實踐中發現,概念辨析這種題型能將混淆的現象、概念和規律緊密聯系在一起。除教材中的“概念檢測”題外,教師還可將容易混淆的知識有針對性地設計為概念辨析題,讓學生經常性地辨析容易混淆的知識。通過不斷地辨析對比,促進學生掌握辨析的方法,提高學生辨別是非的能力,從而培養學生敢于質疑的態度。
例:澳洲大陸原來沒有仙人掌植物,當地人曾從美洲引種作籬笆用,結果仙人掌大量繁殖,侵吞農田。這一實例突出地說明了生物的哪一種特征( )
A. 遺傳和變異
B. 生殖和發育
C. 生長和應激性
D. 適應一定環境和影響環境
從本題立意和考查要求看,主要體現了2個方面:① 抓住了學生的薄弱點,就生物的特征而言,應激性和適應性是較容易混淆的概念,學生只有真正理解應激性和適應性的本質才能做出正確的判斷;② 滲透了概念辨析的基本方法――排除法,根據生物的特征可排除A、B選項,在C和D選項中只要辨析好應激性和適應性就可得出正確選項。本題通過對應激性和適應性的辨析以及排除法的應用,培養了學生的質疑態度,有利于學生“批判性思維”的培養。
3.4 利用圖表題培養學生的批判性思維
圖表題是一種客觀傳遞數據和信息的形式,有些數據與問題有直接關系,有些數據看起來與問題沒有關系,實質存在著一定的間接關系。學生通過對圖表中數據和信息進行多種角度的分析、解讀,對獲得的信息進行選擇、評價和判斷,根據問題進行推論,形成合理假設,然后歸納出支持問題的理由和根據。這種嚴格的思維過程,有利于培養學生具有判斷論據的準確性和可靠性的意識與批判性思維能力。在生物高考試題中有很多此類圖表分析的題目,學生只有具備了批判性思維的技能,才能更好地解答。通過這類題的練習有利于培養學生思維的批判性,提高學生去偽存真、明辨是非的能力。在人教版教材有很多這種類型的題目,教師在教學中要充分地利用以更好地培養學生思維。
例:圖1是有白化和色盲兩種遺傳病的家族系譜圖。假設白化病的致病基因為a,色盲的致病基因為b,請回答:Ⅲ-8、Ⅲ-10的可能基因型是什么?如果Ⅲ-8和Ⅲ-10結婚,子女中只患一種病的概率是多少?同時患兩種病的概率是多少?
篇4
關鍵詞:微生物限度;無菌檢查;方法驗證;影響因素;微生物檢測
微生物學檢查方法包括微生物限度檢查法和無菌檢查法。微生物限度檢查法是檢查非規定滅菌制劑及原輔料受微生物污染程度,包括細菌、霉菌等菌種的數目及控制菌檢查。無菌檢查法是檢查藥典要求的無菌藥品、原輔料等是否無菌。如外用制劑須檢查和驗證銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌;若制劑含藥材原粉等, 還需檢查和驗證大腸菌群和(或) 沙門菌。通過不同給藥途徑,因此臨床給藥途徑在微生物限度檢查和方法驗證中有著舉足輕重的地位。
1 方法驗證的模式及影響因素
1.1 培養基的無菌檢查及菌株準備 使用時應仔細觀察培養基碟子, 檢查是否有微生物污染或干燥收縮。經過預培養的培養基按照相應測定的微生物, 選擇標準菌株(不超過5代) 試驗。控制菌還應設定對照組, 以檢測其專屬性。
1.2 微生物方法驗證的內容
1.2.1 細菌、霉菌、酵母菌計數方法的驗證內容 至少進行3次平行試驗, 分別計算每次各試驗菌的回收率。驗證菌株為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、枯草桿菌。驗證方法分試驗組、菌液組、稀釋劑對照組以及供試品對照組,方法如下:試驗組:采用平皿法計數時,每株試驗菌均制備2個平皿;也可采用薄膜過濾法計數。菌液組:應檢測添加的試驗菌數。稀釋劑對照組:檢查供試液制備時,微生物受污染程度,采用薄膜過濾法計算其菌數。供試品對照組:定量取供試液,采用薄膜過濾法計算其供試品本底菌數。無菌檢查可采用:①薄膜過濾法:采用微孔濾膜攔截細菌,去除可溶性成分。驗證重點:確定濾膜的適用性、沖洗方法以及沖洗液用量。②中和法:中和劑應對微生物無毒性,與抑菌性成分結合后的產物,也應對微生物無毒性。驗證重點:確定中和劑有效,并證明對污染微生物無毒性。
1.2.2 控制菌檢查法的驗證內容 控制菌檢查包括大腸菌群、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、沙門菌、銅綠假單胞菌和梭菌檢查。試驗菌株嚴格按照規定檢查的控制菌,選取相應的驗證菌株。方法如下:試驗組:按照相應控制菌檢查法進行檢查。采用薄膜過濾法時,添加試驗菌應選在最后一次沖洗液后, 過濾后方可注入培養基中。對照組:驗證該檢查方法的專屬性。
1.2.3 細菌、霉菌、酵母菌計數方法的驗證結果判斷指標 根據上述試驗結果,可計算供試品組的菌回收率、稀釋劑對照組的菌回收率。如果任意一次試驗中試驗組的菌回收率,低于70%,應采用培養基稀釋法、薄膜過濾法等方法消除供試品的抑菌活性,并重新驗證。
1.2.4 控制菌方法驗證的結果判斷 按《中國藥典》2005年版規定,陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。如果試驗組檢出試驗菌,則按照相應方法進行控制菌檢查。如果試驗組未檢出,則需重新驗證。控制菌檢查還應設有專屬性試驗。驗證試驗及結果的判斷:①目標菌陽性對照管菌和供試品加目標菌管生長良好;②陰性對照管以及陰性菌對照必須無菌生長。如果上述試驗成立,表示可按照該方法進行該品種的控制菌檢查。
1.3 特殊供試品的制備 由于供試品本身的特性,可能會產生假陰性。在正常生產過程中,利用供試品與微生物的差異,消除供試品對藥品中微生物的影響,從而準確檢測藥品中微生物的真實含量,是較為普遍使用的方法。具體包括:①培養基稀釋法:取規定量供試品/供試液,加至培養基中,使單位體積內的供試品濃度稀釋至無明顯抑菌作用。適用范圍:不能使用薄膜過濾法,抑菌活性較弱的樣品。驗證重點:把握好培養基增加量與供試品/供試液不顯抑菌活性的關系。②離心沉淀法:利用沉降系數差異除去藥渣以及含抑菌活性的部分。適用范圍:不能采用薄膜過濾等方法的樣品。驗證重點:設置有效離心率,確定能將藥渣、抑菌部分除去。③薄膜過濾法:采用微孔濾膜攔截細菌,去除可溶性成分。④中和法:中和劑應對微生物無毒性,與抑菌性成分結合后的產物,也應對微生物無毒性。
2 微生物檢查方法驗證的難點問題
人們對藥品生產、保存和使用過程中,對于可能出現的微生物污染問題進行了大量的研究考察。很多研究資料表明[1,2]:藥品中污染的微生物數量以及微生物種類有不確定性,在藥品生產環節中, 微生物污染存在著隨機性。因此,為了監控藥品生產過程中的微生物污染。所有的藥品必須在安全性檢查后,才能應用于臨床。無論是無抑菌性藥物還是抑菌性藥物,都要進行微生物限度檢查, 特別是某些微生物在一定環境下可能受到損傷, 但當服用至人體后, 條件適宜時仍可生長繁殖,破壞人體健康。抑菌藥物內微生物能夠對人體健康造成危害的情況必須警惕, 因此必須對抑菌性藥物進行微生物限度檢查,但由于其本身的抑菌作用, 這嚴重影響了微生物的檢出。
3討論
藥品微生物限度檢查方法驗證工作是錯綜復雜的過程,控制不當很難達到驗證要求以及預想的試驗效果。嚴格按照操作規范操作, 盡量避免試驗過程中的誤差。
參考文獻:
篇5
【關鍵詞】 微生物限度檢查方法驗證;常規法;抑菌成分
【中國分類號】 R93.6【文獻標識碼】 A【文章編號】 1044-5511(2012)02-0541-02
作為中藥制劑質量的標準檢查項目內容之一的微生物限度檢查,是保證藥品使用安全的中藥工作,如今也越來越受到藥學工作者的重視。微生物限度檢查系非規定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法,檢查項目包括細菌數、酵母菌數、霉菌數及控制菌檢查。我國開展藥品的微生物檢驗工作比較晚,直到1995年版的《中國藥典》才正式收載了微生物限度檢查項,2000版《中國藥典》雖然做了較大的修訂并且增收了以劑型載入的微生物限度標準,但沒有規定對含抑菌成分的藥品經行處理,2005年版的《中國藥典》"微生物限度檢查"項下新增了微生物檢查方法學驗證,這是對于歷年版藥典在微生物檢查法中的最重要補充。中藥制劑中均具有抑菌作用,由于抑菌活性的干擾,用常規法檢查微生物限度的結果不能真實反映出藥品中瘦微生物污染的情況。對此,經行藥品檢驗倩必須采用適當的方法,如培養基稀釋法、薄膜過濾法、中和法或者離心沉淀法來消除供試液中的抑菌活性后,再根據《中國藥典》規定的方法經行檢查。同時,所采用的檢查方法需進行驗證試驗,以確認供試品的抑菌活性和保證測定方法的可靠性,從而提高藥品本身污染微生物的檢出率。為了對規范中藥制劑的微生物先對檢查法提供科學依據,更好地控制中藥制劑的為色和年歌舞先對檢查法提供科學依據。更好地控制中藥制劑的質量,本文特地對近些年已經建立微生物檢查法的一些中藥制劑及其驗證研究情況作如下綜述。
1. 無抑菌成分的中藥制劑的檢查方法
當中藥制劑中不含抑菌成分時,一般用常規法進行微生物限度檢查。在吳宗彬[3]對重感靈片微生物限度經行常規法檢查時,結果供試品中區中試驗菌回收率試驗均達到百分之七十以上,按照2010年版《中國藥典》微生物限度檢查法中的規定:衛生文化年歌舞限度檢查回收率試驗中,若試驗組的菌回收率均不低于百分之七十,就按照供試液制備方法和計數法策動供試品的細菌、霉菌及酵母菌的菌數。由此說明重感靈片無明顯的抑菌現象,可以采用常規法經行細菌、霉菌和酵母菌的檢查、按照2010年版《中國藥典》微生物限度檢查法進行控制菌的檢查[2],結果,3批菌大腸埃希菌和3批大腸菌群檢查試驗組均可檢出試驗菌, 陰性組均無菌生長,陰性對照菌均無生長,說明重感靈片無明顯抑菌現象,可采用常規法進行控制菌大腸埃希菌和控制菌大腸菌群的檢查。韋紅等[4]運用常規法探討了該法對六味地黃丸微生物限度檢查的準確性以及可靠性。結果表明,該供試品對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉5種試驗菌的回收率均高于70%,故本品無抑菌作用,因此采用常規法可以進行本品的微生物限度檢查。按照2010年版《中國藥典》微生物限度檢查法進行控制菌檢
查,結果,控制菌檢查陽性菌生長良好,說明本品對大腸埃希菌大腸菌群沒有抑菌作用;陰性菌均未檢出,表明該控制菌檢查方法的專屬性好,可用于控制菌檢查。趙娟[5]通過對通脈膠囊的微生物限度檢查研究,發現采用常規方法檢查, 該樣品對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌的加菌回收率均高于70%,說明樣品對上述種菌均沒有抑制作用,所以可以用常規法可以進行本品的微生物限度檢查。
韋紅等[6]采用常規法對黃連上清丸微生物限度檢查進行研究。結果表明,該供試品使用常規方法對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉5種試驗菌的回收率均高于70%,稀釋劑對5種試驗菌的回收率均高于70%,故本品無抑菌作用, 而且對控制菌檢查陽性菌生長良好,陰性菌均未檢出。因此,采用常規法可以進行本品的微生物限度檢查和控制菌檢查。
2.有抑菌成分的中藥制劑的檢查方法
中藥制劑所含的成分中有抑菌作用時,首先要選用適當的方法,如培養基稀釋法、薄膜過濾法、離心沉淀法消除供試液抑菌活性后,再根據 2010年版《中國藥典》規定的方法進行檢查。解翠珠等[11]通過采用常規法、稀釋法和薄膜過濾法對鹽酸小檗堿片微生物限度檢查進行研究,發現常規法對5株陽性試驗菌株回收率均低于70%,說明鹽酸小檗堿片不能應用常規法進行微生物的檢查; 然而稀釋法對黑曲霉、 大腸桿菌回收率均高于70%; 薄膜過濾法對金黃色葡萄球菌、 枯草桿菌、 白色念珠菌回收率均高于70%,說明該樣品具有較強的抑菌活性,所以需要采用薄膜過濾法消除該供試品的抑菌活性。對于控制菌,采用稀釋法可以消除供試液對大腸埃希菌的抑菌性,因此可采用稀釋法進行控制菌的檢查。張玉蘭等[12]通過對復方丹參片微生物限度檢查研究,參照2000年版 《中國藥典》、《藥品微生物檢驗手冊》和2000年版《中國藥品檢驗標準操作規范》收載的微生物限度檢查方法,運用常規法、培養基稀釋法、薄膜過濾法3種方法比較。結果表明,常規法和培養基稀釋法均不能消除藥品中抑菌物質干擾, 而薄膜過濾法相對檢出率高而且能充分濾除藥品中抑菌物質,有效檢出該藥品中污染存活的細菌;該方法的陽性對照菌的平均回收率為82.11%。因此,可以用薄膜過濾法作為復方丹參片微生物限度檢查的方法。
余俊等[13]通過采用2005 年版 《中國藥典》(一部) 規定的常規法、培養基稀釋法進行菌回收率比較試驗,對銀黃顆粒、柴黃顆粒、清喉利咽顆粒、柴黃顆粒3種中成藥的微生物限度檢查進行研究。結果表明, 這3種藥品在常規法檢測金黃色葡萄球菌回收率均低于70%。采用培養基稀釋法,金黃色葡萄球菌回收率均高于70%, 說明3種中成藥在常規法檢測時均有一定的抑菌作用,不能用此法進行這3種中藥的微生物限度的檢查。采用培養基稀釋法對這3種中成藥的微生物限度檢查, 菌回收率均高于70%, 因此可以用培養基稀釋法作為復方丹參片微生物限度檢查的方法。豈春風[14]通過對護肝片的微生物限度檢查進行研究發現,在3次獨立的平行的試驗中,護肝片細菌計數采用常規法對金黃色葡萄球菌、 大腸埃希菌、 枯草芽孢桿菌回收率均低于70%, 有顯著的抑菌作用, 因此常規法不適用于護肝片細菌的檢查; 采用培養基稀釋法,霉菌及酵母菌回收率均高于70%, 所以可用稀釋法來檢測護肝片中的霉菌及酵母菌; 采用離心- 薄膜過濾法則護肝片中的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌回收率均高于70%, 因此可用此方法來測定護肝片中的細菌數。
3.兼有抑菌和無菌成分的中藥制劑的檢查方法
一般情況下,由于中藥制劑中大多是復方配方,所以中藥制劑所含的成分較為復雜,有的中藥制劑對有些菌沒有抑菌作用,而對另外一些菌有抑菌作用。對于前者可采用常規法進行微生物限度的檢查;后者要應用培養基稀釋法、薄膜過濾法、 離心沉淀法或中和法消除供試液抑菌活性后,再根據《中國藥典》規定的方法進行微生物限度的檢查。解翠珠等[7]通過采用常規法、薄膜過濾法和稀釋法對紫丹活血片微生物限度檢查進行研究。該供試品接種5株陽性試驗菌株,采用常規法結果對枯草桿菌、白色念珠菌回收率均低于70%,表明該供試品對這2種菌株有抑制作用,而對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉菌回收率均高于70%, 說明紫丹活血片對這幾種菌無抑菌作用;而薄膜過濾法對枯草桿菌、白色念珠菌回收率均高于70%,表明薄膜過濾法對這兩種菌無抑菌作用。故紫丹活血片微生物限度檢查標準方法為細菌數、霉菌數、酵母菌均需采用薄膜過濾法進行測定; 采用常規法對控制菌大腸埃希菌進行檢查及驗證時,試驗組若檢測不到試驗菌,而采用稀釋法試驗組均可檢出試驗菌,陰性組均無菌生長,陰性菌對照組均無生長, 就可用稀釋法對控制菌檢查。汪成偉等[8]通過對桂枝茯苓膠囊微生物限度檢查的研究發現,大腸埃希桿菌、白色念珠菌及黑曲霉回收率均高于70%,而金黃色葡萄球菌及枯草芽孢桿菌回收率低于70%,因此大腸埃希桿菌、白色念珠菌及黑曲霉可采用常規法;采用培養基稀釋法,可使金黃色葡萄球菌及枯草芽孢桿菌的回收率高于70%, 表明采用培養基稀釋法可以對桂枝茯苓膠囊中的金黃色葡萄球菌及枯草芽孢桿菌的檢查。鄭麗莉等[9]通過采用常規法、薄膜過濾法和稀釋法對七葉神安片微生物限度檢查進行研究。結果表明常規法5株菌種的回收率只有大腸埃希桿菌和白色念珠菌的大于70%,金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和黑曲霉的回收率均低于70%,培養基稀釋法黑曲霉菌和枯草芽孢桿菌的回收率大于70%,培養基稀釋法和離心集菌培養基稀釋法對金黃色葡萄球菌的回收率仍低于70%,采用離心薄膜過濾法,金黃色葡萄球菌的回收率可超過70%,證明該供試品對金黃色葡萄球菌具有較強的抑制作用。因此,可用常規法對七葉神安片中大腸埃希桿菌和白色念珠菌的檢查,用培養基稀釋法對黑曲霉菌和枯草芽孢桿菌的檢查,用離心薄膜過濾法對金黃色葡萄球菌檢查。
陳建啟等[10]通過對清感九味丸微生物限度檢查的研究,可以看出采用常規法對大腸埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉回收率不低于70%,其它菌低于70%;培養基稀釋法對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌回收率仍低于70%,表明仍然不能消除其抑菌活性;采用離心- 薄膜過濾法對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌可消除其抑菌活性,2種種菌回收率高于70%。因此,清感九味丸對革蘭氏陽性菌的代表菌株金黃色葡萄球菌和藥品中常見的污染菌株枯草芽孢桿菌抑菌作用較強,常規法和培養基稀釋法回收率都達不到70%,只有用離心- 薄膜過濾各代表菌回收率才達到70%;對于控制菌采用常規法,結果試驗組檢出試驗菌,陰性菌對照組未檢出陰性對照菌,說明用常規法即可檢出大腸埃希菌、大腸菌群。
4.袋裝中藥煎煮劑的檢查
吳紅宇[15]采用中藥抽出包裝機對其醫院自制制劑消炎利膽一號在115 ℃和一定壓力下進行密閉煎煮,煎煮液在常溫(20±5) ℃和冷藏貯存2種情況下,以時間為單位,按照衛生部1990年版 《藥品衛生檢查方法》 收載的內服制劑檢查方法進行衛生學檢查。結果,煎煮液在常溫下40 d細菌總數接近限制值,低溫冷藏在80 d細菌總數接近限制值。
5.總結
上述中藥制劑的微生物限度檢查法已經建立,而對于新的中成藥或者沒有確定微生物限度檢查法的中成藥,其可能具有抑菌或抗菌作用,所以必須經過驗證試驗才能確定這些中成藥的微生物限度檢查法。采用常規法檢驗時,往往造成漏檢或檢查的結果有差異,為此進行藥品檢驗前必須采用適當的方法消除供試品中藥品成分對微生物的抗菌或抑菌作用。由于中成藥是含有多種成分的復合制劑,具有抑菌作用的中成藥的抑菌作用的程度可能不同,抑菌活性所采用的方法也不盡相同。所以藥品生產企業和研究單位應該根據中藥制劑自身的特點,在進行藥品微生物限度檢查時,選擇可行的、有效的且操作簡便、快速的方法。隨著中藥制劑的不斷發展,其微生物限度檢查方法也在日益完善。《中國藥典》藥品微生物限度檢查是以劑型為標準,而《美國藥典》(24版)則是以品種為標準收載。由于中成藥和化學藥各有特點,其微生物限度檢查法也不能生搬硬套,全部效仿國外。所以,應盡快投入大量的人力、物力,有組織、有步驟地研究,以按照中藥自身的特點以及國外藥典中的精華部分來建立中藥制劑微生物限度檢查方法,人民群眾安全用藥、保證中藥制劑質量提供重要的保證。
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篇6
關鍵詞:空氣微生物;微生物污染;微生物監測
中圖分類號:X831
文獻標識碼:A文章編號:16749944(2017)8009102
1引言
人類的生存離不開大氣,空氣作為人類生存的必須條件以及重要物質,它保證了人類進行生產等活動,但是,從另一個角度來看,有污染的也會威脅到人類健康。特別在現代社會中,隨著人口數量的急劇增長,大地植被覆蓋面積減少,加上一些不正規的動物養殖場和垃圾處理廠,如果沒有做到有效的衛生防治措施,會造成十分嚴重的空氣污染。空氣中的微生物數量急劇上升,并且這些微生物中包含了大量威脅到人類健康的病原微生物,這些微生物會隨著人類的呼吸,通過呼吸道進入人體肺部,可能造成呼吸道疾病或者肺部感染。所以,空氣微生物的監測對于保護人類健康是十分有意義的。
2空氣微生物污染及其污染現狀
雖然空氣微生物不能被人類的肉眼所看到,但是其作為生態系統的一個組成部分,也是不可被忽視的。空氣微生物一般由一些細菌、病毒、放線菌等細微生命體構成,在不同的地方其組成濃度一般不同,空氣微生物的數量也是空氣質量的重要標準。空氣微生物的種類繁多,目前的研究表明,空氣中的真菌種類多達4萬多種,而細菌和放線菌的也有上千種。這些空氣微生物來自于地球表面的各個地方,如土壤,湖面等,并且人類的活動也是空氣微生物的來源,其中,需要特別注意的是一些養殖場、垃圾處理廠等地方,由于有大量的動植物,會導致空氣中出現大量微生物。這些空氣微生物并不會直接在大氣中存在,雖然一部分空氣微生物對于這種較干燥的環境以及紫外線有一定的抗性,但是空氣微生物在空氣中還是多以微生物氣溶膠的形式存在,此外,真菌會以單個孢子的形式存在于大氣中。微生物氣溶膠,簡單的來說,就是存在于空氣中的一個分散體系,其實質是一些固態或者液態的微粒,在這些微粒上依附著微生物。根據不同的空氣微生物種類,這些微生物氣溶膠顆粒的大小也是不同的,較小的微生物氣溶膠顆粒粒徑只有0.1μm,而較大的生物氣溶膠顆粒例如花粉的粒徑可以達到100μm。這些微生物氣溶膠在大氣中停留的時間不會太久,根據當地的氣候情況,都會帶動微生物氣溶膠的運動,它們最終會在氣流的運動或者其它原因向下落到地表或者動植物的表面。
近幾年,對空氣微生物的研究已經取得了一定的發展,但是就目前國內的傳染病狀況而言,情況不容樂觀。禽流感病毒依然在進行大范圍的傳播,就如幾年前的肺炎一樣,席卷這片大地。如今,禽流感病毒從一個地區,通過大氣,傳播到另一個地方,對國內甚至是全球都造成了較大的影響。因此,必須加大對空氣微生物的研究,減小空氣微生物污染的程度,并且需要將環境監測和公共衛生管理進行相適應的結合,保障人類的健康。
3基于微生物生長的空氣采樣器
隨著社會的進步,利用一些現代化的技術手段,經過不同研究者的設計,目前已經有了多種基于微生物生長的空氣采樣器。最基本的有通過自然沉降的方法進行采樣,這種方法即利用微生物自身的重力,讓空氣中的微生物顆粒緩慢的自然沉降,通過一段時間的采集,空氣中大部分微生物已經落到下面帶有培養介質的裝置上,即完成采集,同時進行后續的培養。但是這種方法的缺點很明顯,一些懸浮在空氣中的小顆粒的微生物,不能被此方法檢測到,同時,外界空氣的流動也會對此采樣方法的結果造成較大的影響,所以,這種方法一般僅僅作為一些菌粒子沉著的研究。為了避免上述采樣方法的缺陷,研究人員發明了通過靜電進行采集的方法,并制造出了靜電沉著采樣器。這個儀器通過制造高壓靜電場,讓空氣中的微生物帶上一定量的電荷,這時,這些微生物就會被同時帶有相反電荷的采集面吸引,這樣就完成了空氣中微生物的采集工作。但是,有一個問題依然沒有得到解決,那就是采集器的采集范圍過小。這時候,動力類的采集器便應運而生了,其實質就是在動力類空氣微生物采集器內部設置了抽氣泵,對于動力類空氣微生物采集器,可以進行現場空氣抽取采集,相較于傳統的利用重力或者靜電力的采集器,動力類空氣微生物采集器的采集范圍更大,并且采集過程更加快速,采集效率得到了質的提升。
經過采集器采集到的微生物,需要進行進一步的培養,一般來講,利用一些常規的培養基即可進行。但是空氣的情況比較復雜,所以在微生物的培養過程中,需要根據實際情況添加適當的抑制劑或者其它選用試劑,同時,空氣微生物的培養條件也是必須注意的。
4無需培養的快速微生物檢測方法
4.1需輔助試劑類
傳統的微生物檢測方法因為要進行培養等操作,耗費時間長,且結果誤差較大,已經不能滿足現代市場的需求。隨著微生物實時熒光光電檢測技術的出現,便得到了社會廣泛的認可,已經在醫藥等行業得到普遍應用。這項技術將傳統的微生物檢測技術與現代化的計算機技術相結合,將微生物的檢測時間大幅度縮短,并且由于自動化技術的應用,對于人力資源的投資也大大減少。其最根本的技術就是利用三磷酸腺苷與其他試劑的反應,一般是與三磷酸腺苷酶進行酶促反應,通過添加熒光素來顯示反應的信號,因為三磷酸腺苷存在于所有的生物中,通過檢測這種反應放出的信號,確定微生物的含量。這項微生物檢測技術在發達國家如美國以及日本已經得到發展和應用,相應的此類產品也比較成熟。在國內,此項技術也被應用于食品的檢測以及衛生監督。
4.2無需輔助試劑類
雖然熒光檢測技術有其先進性,但是在使用上,仍然不能避開較為高昂的試劑費用,相較于此,一種新型的檢測方法優勢更加明顯。這種新的檢測方法是通過分析生物體的代謝產物以及核黃酸,最終確定微生物的含量,雖然這種方法利用的原理仍然為熒光檢測原理,但是相較于傳統的熒光檢測技術,此方法不用等待酶促反應的時間,能夠在瞬間得到數據。此外,這種方法與計算機科學以及自動化技術相結合,發展成為一個實時O控系統,能夠實時的提供檢測數據,這種設備普遍應用于醫藥行業,特別是藥品制造行業。因為自動化技術的應用,不僅做到了對微生物的監測,從另一個角度看,藥品的生產過程沒有了人員的參與,也減少了由于人員參與制藥過程帶來的污染。
5結語
近年來,關于空氣污染話題的討論越演越烈,引起人們的極大關注,要想對此問題作出有效的解決方案,就要對空氣中微生物的含量進行準確的監測,瞬時檢測系統的使用必然會成為將來的主流檢測方法,并且通過對其成因分析,進行有效的治理,保障人類的健康。
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篇7
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關鍵詞 土壤微生物 分解作用 涂布平板法
中圖分類號 G633.91 文獻標識碼 B
“土壤微生物的分解作用”是人教版高中生物必修內容中的探究實驗之一,旨在讓學生通過宏觀的實驗現象了解微觀的實驗原理,明白微生物在生態系統物質循環中的重要作用。然而由于實驗周期長,實驗現象較不明顯,開展該實驗的學校寥寥無幾。
1 教材分析與實驗條件選擇
在人教版“土壤微生物分解作用”的實驗中,教材提出了2個參考案例。第一個案例,使用落葉為實驗對象,設置滅菌土壤為對照組,對比得出土壤微生物具有分解作用;第二個案例:使用淀粉為實驗對象,通過斐林試劑和碘液的顯色反應,得出土壤微生物具有分解作用。對比發現,第二個案例實驗時間適中,實驗現象較為明顯;同時復習了斐林試劑的使用方法,較適合開展實驗教學。因此,筆者選用第二個案例(土壤微生物對淀粉的分解作用),對“土壤微生物的分解作用”進行實驗研究。
溫度、淀粉糊濃度和反應時間是影響土壤微生物分解作用的主要因素。筆者選取了15°C、20°C、25°C、30°C和室溫等5個溫度,2%、4%、6%和8%等4個淀粉糊濃度以及5 d、7 d和9 d等3個反應時間,探究它們對土壤微生物分解作用的影響。
特定土壤的pH是確定值,而pH的變化會影響土壤微生物的分解作用。在確定適宜的溫度、淀粉糊濃度和反應時間之后,以pH為變量,繼續探究pH對土壤微生物分解作用的影響。
為了使實驗結果更具科學性,需要設置對照組。筆者在教材的基礎上增加了滅菌土壤浸出液作為第二對照組,排除了土壤浸出液中其他非生物因素的干擾,增加了實驗的嚴謹性。
在教學研究中,有學者使用不同種類的土壤進行實驗,以確定哪種土壤微生物的分解能力最強。土壤微生物分解能力的強弱,主要受微生物種類和數量的影響。因此,為了揭示土壤微生物數量對分解作用的影響,筆者根據《微生物實驗》的相關內容,采用涂布平板法,對實驗的土壤微生物進行計數,初步確定土壤微生物的分解能力。
綜上所述,“土壤微生物的分解作用”實驗可劃分為三個小實驗,分別是:(1) 土壤微生物對淀粉分解作用實驗;(2) pH對土壤微生物分解作用的影響實驗;(3) 土壤微生物計數實驗。其中第一個小實驗為主實驗,第二、第三個小實驗為擴展實驗。
2 實驗設計
2.1 實驗器材
實驗器具:小燒杯、試管、三角瓶、玻璃棒、pH計、恒溫光照培養箱、牛皮紙、紗布。
材料和試劑:土壤、淀粉、斐林試劑、碘液、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、NaCl、稀HCl、稀NaOH、無菌水。
2.2 實驗步驟
2.2.1 土壤微生物對淀粉的分解作用
(1) 土壤浸出液的制備:按照課本介紹的方法制備。
(2) 淀粉糊的制作:分別稱取10 g、20 g、30 g和40 g淀粉,溶于500 mL開水中,充分攪拌,制成糊狀,得到濃度分別為2%、4%、6%和8%的淀粉糊。
(3) 滅菌:將蒸餾水、部分土壤浸出液、各濃度淀粉糊、實驗所用的燒杯和試管等器皿放入滅菌鍋中滅菌。
(4) 加樣培養:按照課本介紹的方法,在無菌環境中操作加樣,并將實驗溶液分別放入15°C、20°C、25°C和30°C的培養箱及室溫中培養
(5) 顯色反應:按照課本介紹的方法取出實驗溶液進行顯色反應。
2.2.2 pH對土壤微生物分解作用的影響
(1) 土壤浸出液pH的測定和調節:使用北京哈納HI8424NEW型pH計測出土壤浸出液的原始pH值為8.12;使用稀HCl和稀NaOH溶液,將土壤浸出液的pH上下各調節1.5和3.0個pH單位,選擇5.12、6.62、8.12、9.62和11.12等5個pH作為實驗pH。
(2) 制作淀粉糊、滅菌、加樣、培養與顯色反應操作同2.2.1。
2.2.3 土壤微生物的計數(涂布平板法)
計數實驗包括配制細菌培養基、倒平板、制備土壤稀釋液、涂布和培養等五個步驟,具體操作同《微生物實驗》教材。
3 實驗結果
3.1 土壤微生物對淀粉的分解作用
實驗結果表明,土壤微生物對淀粉的分解作用與溫度、淀粉糊濃度和分解作用的時間有關。30°C下,土壤微生物的分解作用最強烈,室溫(25°C~30°C)下次之,25°C、20°C和15°C下的分解作用依次減弱。土壤微生物對4%淀粉糊的分解作用最強,其次是2%、6%和8%。隨著時間的推移,土壤微生物對淀粉的分解作用逐漸增強;培養的第5 d,已有顯色現象;第7 d顯色現象顯著;第9 d和第7 d的實驗現象相差無幾。從顯色劑的顯色效果看,加入斐林試劑的實驗現象更直觀明顯。淀粉被分解后,產生的葡萄糖與斐林試劑作用,生成很明顯的磚紅色沉淀;加入碘液后,實驗溶液依舊變藍,只是顏色較對照組淺。這說明,一方面斐林試劑的顯色效果較顯著;另一方面,短時間里淀粉不能被分解殆盡。
3.2 pH對土壤微生物分解作用的影響
pH為8.12的原始土壤浸出液中,微生物對淀粉糊的分解作用結果最明顯,出現最多的磚紅色沉淀;弱酸(pH6.62)和弱堿(pH9.62)性的土壤浸出液中,微生物對淀粉糊的分解作用結果出現較多的磚紅色沉淀,但均少于原始pH的土壤浸出液;強堿性(pH11.12)的土壤浸出液中,微生物對淀粉糊的分解作用結果產生較少的磚紅色沉淀;強酸性(pH5.12)的土壤浸出液中,微生物對淀粉糊的分解作用結果產生最少的磚紅色沉淀。碘液的顯色反應結果并沒有明顯的差別,說明只有部分淀粉被分解。
3.3 土壤微生物的計數
涂布平板結果顯示,土壤浸出液中微生物的含量約為668 889個/mL;根據之前的實驗步驟得知,實驗土壤浸出液濃度為0.1 g/mL,因此土壤中微生物的含量約為6 688 890個/g(表1)。有教學條件的學校可設計該實驗,分析不同土壤微生物具有不同分解作用的原因,讓學生更深入地理解和掌握知識,培養學生的科學素養和探究精神。
4 討論
“土壤微生物的分解作用”實驗中,材料易得,操作簡單,可以在教學活動中順利實施。許多學校由于實驗時間較長,影響教學安排,而很少開展這一探究活動。但筆者發現,該實驗不但可以在短時間內完成,而且能開發出與之相關的教學實驗,如pH對土壤微生物分解作用的影響、土壤微生物計數等,這對學生創新思維的培養大有裨益。如果學校教學條件有限,無法順利開展該實驗,可由教師演示或者播放實驗錄像,以取得一定的教學效果。
在本實驗中,筆者并未以土壤類型為實驗變量,探究不同土壤中微生物分解作用和微生物數量的異同。但學校在安排教學活動時,可以將學生分組,不同小組以不同的土壤為研究對象開展實驗。這樣既節約了時間,又可以達到很好的實驗效果。
本研究確定的適宜實驗條件,可以為廣大師生提供參考。各學校也可以借鑒筆者的思路,開展類似實驗,并安排不同學生完成不同條件下的實驗,最后匯總結果,探討比較。這不僅能幫助學生培養團隊合作精神和創新實踐能力,也能激發學生對生物學實驗的熱情,進一步培養學生對生物學科的興趣。
參考文獻:
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關鍵詞: 微生物學基礎實驗教學 教學改革 創新能力
微生物學是生物學各專業的基礎必修課。同時也是一門應用性和實驗性很強的學科,微生物實驗技術廣泛滲透到現代生物技術各個領域,是現代生物技術的基礎[1]。微生物學實驗是微生物學重要的基礎教學環節,微生物基礎實驗是微生物實驗中的基本技能和基礎訓練部分,只有掌握好基本技能和基礎知識,學生才能順利進行微生物學和生物技術的其他實驗。對微生物基礎實驗教學進行改革,旨在提高學生的實驗基本操作技能,調動學生的學習興趣和學習積極性,進而提高實驗教學質量。
1.課程現狀分析
1.1微生物實驗內容多,教學任務重。由于微生物學實驗涵蓋面廣,學生需要掌握的操作技能和知識點多,以沈萍主編的《微生物學實驗》為例,編入的實驗項目就有76個之多[2],如果以傳統的教學方法來授課,難以在規定學時內完成教學內容。
1.2開設的實驗多為驗證性實驗,綜合性實驗和創新性實驗太少,不利于學生創新能力的培養。
1.3考核方式與評分方式欠合理。多數院校的評分方式為理論考核占70%,平時成績占20%,實驗操作僅占10%。實驗操作比重小,無法反映實驗操作在課程學習中的地位和作用。
2.微生物學基礎實驗教學改革的思路
2.1通過微生物學基礎實驗教學改革加強學生操作技能的訓練,為學生從事生物技術的教學、研究打下良好的基礎。
2.2通過微生物學基礎實驗教學改革,加大綜合性實驗在微生物實驗中的比例,加強對學生綜合分析能力的培養。
2.3通過微生物學基礎實驗教學改革,提高學生的學習興趣。
2.4通過微生物學基礎實驗教學改革,壓縮微生物學基礎實驗教學的課時,為進行創新性實驗提供必要的課時,增強學生的實踐能力,加大對創新能力的培養。
3.微生物學基礎實驗教學改革的措施與方法
3.1整合優化實驗教學內容
為了保證微生物學實驗教學質量,達到通過實驗教學提高學生實驗動手能力和創新能力的目的[3],我將微生物學實驗分為“基礎實驗”、“綜合設計性實驗”和“創新性實驗”三部分。“基礎實驗”側重于學生實驗方法和實驗技能的訓練,是一些驗證性實驗,使學生掌握一定的微生物學實驗知識和操作技能;“綜合設計性實驗”側重于訓練學生對學習過的微生物學知識的綜合運用能力;“研究性實驗”是學生自主進行的課題研究或參與老師的科研項目,注重學生創新能力的培養。
微生物學基礎實驗內容多、教學任務重,只有對實驗教學內容進行整合,才有一定的課時開展選做實驗和綜合設計性實驗的教學,將多個實驗內容密切相關的基礎實驗,整合成一個綜合性實驗。
如:將培養基配制、高壓蒸氣滅菌、干熱滅菌、土壤微生物分離等基礎實驗整合為一個綜合性實驗;將微生物純化與微生物的形態觀察,無菌操作接種等若干相關的基礎實驗整合為一個綜合性實驗;將革蘭氏染色、鞭毛染色、芽孢染色等與微生物制片染色有關的基礎實驗整合為一個綜合性實驗―微生物染色技術。這樣一方面節約了基礎實驗的實驗課時,使學生有更多的課時用于創新性實驗,另一方面使學生參與了整個實驗過程,接受了更多的基礎訓練,具備了獨立進行創新性實驗的能力。
3.2調整實驗課教學的課程順序
根據理論教學的進度,從形態觀察開始進行實驗教學是微生物實驗教學的一般做法,這種安排對配合理論教學是有益的,但不便于教學內容的整合,同時教學內容簡單,學生的學習積極性不高。我將課程順序調整為培養基配制、微生物分離與純化、微生物的形態觀察、微生物染色技術,讓學生用簡單的化學物質配制成培養基,然后從土壤中分離純化出各種微生物,而形態觀察和其他實驗所使用的菌種都是學生親自分離純化出來的,更能激發學生的學習興趣。
3.3改進實驗教學方法
由于微生物實驗的結果受制于多種因素影響,學生操作不熟練,其效果難以把握,因此課前預習是必需的。為了做好課前準備,我將實驗內容的視頻資料提前發到學生郵箱,并要求寫出預習報告。課堂采用多媒體實驗教學與傳統實驗教學相結合,即采取“講―看―做”或“邊做邊講,邊做邊看”的教學程序。首先實驗教師介紹實驗課的原理、目的,并結合多媒體讓學生觀看實驗操作過程,同時講解實驗操作的原則、步驟,以及技術要點、注意事項,等等。然后學生獨立進行實驗操作,在操作過程中根據實驗的具體情況針對性地進行講解和觀看視頻資料。這樣使學生操作的準確性得到保證,同時獲得理想的實驗效果。
3.4改革實驗考核方式
微生物基礎實驗是微生物實驗的基礎內容,也是其他相關課程的重要的基礎知識和基本技能,加強微生物基礎實驗的考核對保證實驗教學的質量有明顯的促進作用。我在具體實施中采用“預習報告+操作考核+實驗報告=基礎實驗成績”的模式,進一步提高操作考核在實驗成績中的比重,操作考核在實驗過程中進行,對于關鍵的操作技能實行“一對一”的考核方式,確保了學生較為熟練地掌握該項技能。
4.微生物學基礎實驗教學改革的效果
通過微生物學基礎實驗教學改革,教學效果明顯增強。
4.1由于強化了預習環節的重要性,學生都能在進入實驗前預習實驗教材,觀看實驗過程的視頻資料,寫出預習報告,實驗過程中都能迅速進入狀態,操作的準確性也得到了很大的提升,在增加了教學任務的情況下,能按時完成實驗。
4.2學生學習興趣顯著提高,由于調整實驗課教學的課程順序,學生對實驗教學各環節有了更直觀的了解,學習興趣明顯提高。
4.3通過實驗實驗項目的整合,壓縮微生物學基礎實驗教學的課時,學生有了進行創新性實驗的時間,更加注重創新能力的培養。學生創新能力得到提高,在“大學生研究性學習與創新性實驗計劃項目“、“挑戰杯”創新大賽、研究生招生考試等方面都顯現出相當的優勢。
參考文獻:
[1]施翠娥,童貫和.師范院校微生物學實驗教學改革與實踐[J].淮南師范學院學報,2010,12,(3):106-108.
[2]沈萍,范秀容,李廣武.微生物學實驗[M].高等教育出版社,2003,5.
篇9
【關鍵詞】調味品;微生物檢驗;無菌操作
【中圖分類號】R156.3【文獻標識碼】B【文章編號】1005-0515(2011)12-0281-01
調味品是指包括醬油、醬類和醋等以豆類為原料發酵而制成的食品,是人們生活必備食品之一。由于調味品通常是利用微生物發酵工藝制得,如工藝控制不當,滅菌處理不徹底很容易造成微生物的殘留和繁殖,影響產品的品質甚至危及人們的身體健康。食品微生物檢驗的目的就是要為生產出安全、衛生、符合產品標準的食品提供科學依據,因而對食品微生物進行檢驗至關重要。食品衛生微生物學檢驗的標準都制定了菌落總數、大腸菌群和致病菌等微生物指標來控制產品質量,國家標準中也對調味品的微生物學檢驗方法、步驟做了具體規定,但在實際工作中還存在著許多復雜因素,忽視這些因素很可能給檢驗結果帶來偏差,甚至錯誤。本人就調味品微生物檢驗中應注意的幾個環節談幾點認識。
1人的因素
實驗室應該由具有一定資質的微生物學或相近專業的人來操作,必須經考核合格后持證上崗,檢驗人員必須有強烈的責任意識,嚴格遵守操作規程,具有較熟練的操作技能。微生物檢驗人員不僅要有嚴謹的工作態度,還要具有質量意識,有發現問題!解決問題的能力"不僅要掌握微生物學的有關基礎知識,還要掌握國家食品衛生微生物檢驗方法[1]GB/T4789-2003!調味品的國家標準!行業標準,熟悉標準化法!計量法規的相關知識,熟悉調味品的生產工藝。
2培養基和試劑
培養基和試劑應該有供應商提品質控證書,并以外觀、批號、PH值、滅菌要求、選擇性等進行初步評估,質量必須符合有關的質量標準,再按照說明書的貯藏條件保存。培養基應在玻璃容器內配制,避免與銅、鐵制器皿接觸,配制過程應嚴格按GB/T4789-2003及新國標GB4789-2010的相關內容規定。配制時按規定的配方和順序添加,不得隨意更改,并使用蒸餾水,以免自來水中的漂白粉、氯氣等抑制微生物生長[2]。培養基配好后,先調節PH值,再高壓蒸汽滅菌,并應及時使用,即使4℃冰箱存放,也要在2周內用完,已開封用過的培養基不得再次使用。有條件可參加國際食品微生物與食品衛生委員會(ICFMH)提供的關于培養基質控方法進行質控,配制培養基和藥劑應有原始記錄,保證檢驗數據的可溯源性。
3設施、環境
實驗室應具有進行微生物檢驗適宜充分的設施條件,包括檢測設施(專用于微生物檢測和相關活動)及輔助設施(大門、走廊、管理區、樣品區、清潔間)特殊的設備要在特殊的環境下放置和操作。
3.1無菌實驗室的建設應符合GB19489的規定,符合無回路的原則,設有人流和物流通道。
3.2儀器設備:
微生物檢驗室應配備足夠檢驗工作需要的儀器設備,包括恒溫培養箱、電熱干燥箱、高壓蒸汽滅菌器、天平、恒溫水浴、生物顯微鏡、凈化工作臺及移液管、試管、平皿、廣口瓶等玻璃器皿。儀器設備、計量器具應由計量檢定部門檢定合格,嚴格按照操作規程要求使用,填寫儀器設備的使用記錄。貴重儀器設備應有專人管理。定期對儀器設備進行維護、校準和做好設備的期間核查工作,保證儀器設備處于良好的工作狀態[3]。用具刷洗徹底、無殘留物,無菌用品使用高壓蒸汽殺菌,并烘干備用。殺菌后物品在一個星期內未使用,需重新殺菌。對于容量較大的密閉容器,殺菌前瓶內應裝入少量水,將容器蓋子略旋開,以使容器內部能形成蒸汽進行有效地殺菌。每次殺菌應使用橫變試紙檢查殺菌溫度是否達到要求。
4樣品采集
樣品的采集必須具有代表性,要考慮到各種影響樣品質量的因素,防止樣品受到外源性污染,防止樣品變質和細菌生長,采樣必須在無菌操作下進行,所謂無菌操作是指杜絕任何病原性或非病原性微生物進入樣品。采樣要按照我國食品衛生標準方法進行,樣品要登記并注明名稱!數量!批號!采樣日期等,不同的調味品要采用不同的運輸和保存方法,可根據情況參照國際食品規格委員會(ICMSF)推薦的食品采樣方法和標準建立可靠的質量評價方法以保證樣品合格[4]。樣品的采取必須具有代表性,一般應采取完整未開封的樣品,散裝樣品必須在無菌操作條件下使用無菌器具采集樣品送到實驗室,不應超過3~4h,否則應置于低溫環境中待檢。
5檢驗
5.1方法:
檢驗方法是食品微生物實驗室質量保證的重要步驟,目前食品微生物檢驗必須按照食品衛生檢驗方法微生物學部分所規定的檢驗方法操作或其他官方認可的方法進行,微生物檢驗必須按無菌操作要求進行。在檢驗過程中還要注意三點:(1)做平行樣,以保證結果的可比性;(2)設立空白對照,以防止其它污染而導致的結果不準確;(3)設計合適的質控頻率,進行質控試驗,將質控菌株與常規工作一起進行,不能專人專做,當質控標準菌株的內在敏感性發生改變時要更換新的菌種。
5.2操作:
(1)操作人員必須牢固樹立無菌觀念,整個操作均要求無菌操作,盡量靠近火焰,動作要迅速,從微生物的分離、純化到接種,手法規范,嚴格按照GB/T4789食品微生物檢驗標準中的操作規程進行檢驗。
(2)進入無菌室從樣品的制備到檢驗都要為防止二次污染采取必要措施,如樣品及器皿擺放整齊便于操作,操作過程熟練。
(3)樣品取樣時用無菌工具無菌操作取樣。
(4)原始記錄要真實準確,不得隨意填寫,按照GB/T4789標準規定的方法進行數據處理及結果判定。
6結果與報告
檢測結果應準確、清晰、客觀的在檢驗報告中進行表述,要注意計算、書寫,如有涂改,要以杠改,并簽上檢測人姓名,經審核人員核查簽字并蓋章后生效,檢驗原始記錄應及時記載,格式要求有足夠的信息量,并具有可朔源性,如有第幾法要求也應標注清楚,不應混記。
綜上所述,只要我們遵守職業道德,嚴謹科學態度,注意以上幾個環節就能使我們調味品微生物檢驗數據的準確性得以保證,以把好調味品衛生和安全提供可靠依據。
參考文獻
[1]GB/T4789-2003,食品衛生微生物學檢驗[S].北京:中國標準出版社,2003。
[2]陳劍剛.B/T15481-2000標準在衛生檢驗質量控制中的應用[J].中國衛生檢驗雜志,2002,12(4):487。
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關鍵詞:微生物學;教學改革;制藥工程專業
中圖分類號:G642.0 文獻標志碼:A 文章編號:1674-9324(2016)42-0128-02
一、目前存在的問題
我校制藥工程專業將專業定位成工程類,開設了較多工程類的課程,對微生物學這門課程不夠重視;該課程設置為專業選修課、考查課;缺少實踐環節;缺少專業特色。使學生走進“制藥工程只需要面對制藥的儀器設備,知道制藥的工藝就可以了,微生物學對我們專業沒用”的誤區。導致學生學習微生物學的動力和興趣都不高。因此,有必要對制藥工程專業微生物學的教學內容、教學方法等方面進行改革和思考,幫助學生走出誤區。
目前關于制藥工程專業的微生物學教學的探討相對較少,僅從教材和實驗教學有少量探討。因此結合銅仁學院制藥工程專業教學課時較少,缺少實踐部分教學安排,考核方式為考查等課程設置中出現的問題,課題組從教學內容、教學方式、教學手段、考核方式等方面對該專業微生物學課程教學進行了有益的探索,為促進制藥工程專業微生物學教學的完善,為培養應用型人才奠定堅實的基礎。
二、選擇教材和教學內容
1.教材選定。教材選擇方面充分考慮銅仁學院制藥工程人才培養方案的設置,突破原有的一門課程一本教材的固有觀念。選擇滿足既要基礎知識又要專業應用相關知識的專業需求的教材。但目前尚無專門針對制藥工程專業的微生物教材。因此,初步確定教材選用黃秀梨主編的《微生物學》與沈關心主編的《微生物學與免疫學》。
2.教學內容選定。(1)理論教學內容。教學內容選擇主要從幫助學生建立系統的微生物學概念,以及聯系藥物的生產實際,理解微生物與藥物及藥物生產的關系兩個方面著手考慮。黃秀梨主編的《微生物學》的內容作為微生物學基礎知識部分,幫助學生建立有菌、無菌、什么菌的概念和意識;掌握微生物生長和繁殖、代謝,微生物控制、菌種保藏等制藥工程專業密切相關的微生物基本知識。沈關心主編的《微生物學與免疫學》的內容作為微生物在制藥專業中應用的知識,幫助學生了解藥物生產過程中微生物的影響和處理方式、微生物藥物的重要地位、研究步驟、生產過程;了解常見的病原微生物等。結合專業特點深入介紹微生物在制藥中的應用對制藥過程的影響;有害微生物的控制;抗生素的制備及應用;微生物其他產物在制藥中的應用;藥品的微生物學質量控制;藥品的微生物學質量控制等微生物在制藥應用的相關知識。(2)實踐教學內容。銅仁學院制藥工程專業也同其他大多數高校的制藥工程專業一樣忽略了微生物學在制藥工程中的重要性,課程中未設置實驗課程。為幫助學生掌握微生物學的基本實驗機能,增加了實驗課,主要包括培養基制備、接種、培養,自然界純種微生物分離,細菌檢查及其生理生化反應,菌種保藏等以微生物控制為基礎的實驗課程。使學生掌握微生物研究與應用的基本技術,培養學生發現問題、獨立思考與創新思維能力,增加學生就業面。
三、合理的教學方法
在教學過程中,同時針對不同的內容,采取不同的教學方法。總體思路為基于學生已有的知識,以微生物在制藥工程中應用的實例為主線引導學生主動學習書本知識。讓學生感受到微生物在自己專業中是如何應用,引起學生對微生物學的興趣,再講解基本原理等重點和難點。
1.探討式。借鑒慕課的教學方式,學習之前先提出問題或案例,要求學生課前進行學習,課堂上分組就問題或案例用微生物學知識進行討論討論。例如抗生素頭孢的生產,在課前首先提出分組查閱頭孢的生產過程、生產菌株,產生的機理,生產過程中微生物需要如何控制,如何確定藥品的質量等內容,再回到課堂就自己查閱到的知識與同學交流、探討。以此活躍課堂氣氛、引起學生濃厚的興趣。對于學生不懂的知識,充分利用學生已有的知識逐步引導學生理解,取得了很好的教學效果。
2.研究式。教學過程中注意將最新的研究引入到教學中,豐富和更新教學內容,提高教學效果。通過建立以科研輔助教學,以教學促進科研的互補的模式。引導學生培養科研思維、學習科學研究方法。鼓勵有興趣的學生參加教師的科研項目,參與鍛煉動手操作,發現問題、解決問題的能力,提高學生的科研素質。
3.自學式。對于內容相對簡單,學生容易理解,并且有較多獲得渠道的部分章節選擇由學生自學,利用少量的課堂時間,讓學生上講臺講解自己學習的知識。既可以促進學生自主學習的興趣,同時還能鍛煉學生表達能力、語言組織能力,幫助學生克服怯場或膽小的問題,提高學生的自信。
四、多樣化教學手段
根據微生物學的特點,在教學過程中借用現代化手段,幫助學生理解。將文字、圖片、動畫、視頻、聲音等手段將內容簡潔、直觀地展現在學生面前。節約時間的同時進一步提高學生學習興趣。
五、考核
通過教學內容的選擇,教學方法的搭配雖然能在一定程度上提高學生學習興趣,促進學生自主學習;但尚不足幫助學生合理分配學習壓力。需要通過合理設置考核方式、考核內容,將學習壓力分散到學期的各個時段。考核分為平時考核與期末考核兩部分,比例為平時考核50%;期末考核50%。平時考核中包括4次課堂考核占50%,平時作業,課堂討論,課堂講解,考勤、平時回答問題分別占10%;期末考核包括期末筆試和實驗考核分別占70%和30%。實驗考核通過期末操作考核體現。可提高學生對實驗的重視。